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南宫28细胞贴壁优化指南:包被技巧与产品选择

来源:甄莺娟 日期:2025-03-12

南宫28在生物医疗领域的材料设计中,当前市场上主流产品为塑料培养皿,其底部开孔(直径范围2-15mm),配合017mm厚的盖玻片,以满足共聚焦物镜校正环的要求。然而,观测区域仅使用玻璃材质,在细胞贴壁方面却面临着挑战:玻璃表面的疏水性使得细胞难以附着,并且在成像过程中容易脱片。

南宫28细胞贴壁优化指南:包被技巧与产品选择

为了解决细胞贴壁困难的问题,南宫28建议通过蛋白涂层(如Poly-L-Lysine)对玻璃表面进行修饰,以增强细胞的黏附力。此外,市场上还可以选择预包被或进行亲水改性的共聚焦专用培养皿,以作为替代方案。

在试剂的选择上,常用的包被试剂包括Poly-L-Lysine(PLL)、胶原蛋白和纤连蛋白。在浓度优化方面,应根据不同细胞类型进行预实验梯度测试,推荐的浓度范围为05-10μg/cm²。以下是以PLL为例的计算示例:首先,将超纯水按照1:5比例稀释PLL原液(由100μg/ml稀释到20μg/ml)。然后,将400μl的稀释液均匀加入到35mm的培养皿中,确保覆盖整个观测区域。接下来,在室温下孵育1-2小时后吸弃液体,使用2ml PBS或无血清培养基清洗3次,并彻底吸干残留液体。最后,直接接种细胞悬液,避免培养皿干燥。

在操作过程中的无菌操作要求则是必须在超净台内完成全程包被,以避免引入外源污染。在首次使用时,建议设置浓度梯度(例如05/2/5μg/cm²)以筛选最佳的贴壁条件。同时,清洗后应立即接种细胞,防止玻璃表面二次疏水化。

针对光学兼容性,底部厚度需控制在≤02mm,透光率应达到90%(以匹配共聚焦物镜的NA值)。表面处理方式可以采用等离子亲水涂层或化学改性,接触角需小于30°。此外,培养皿的透气性应与标准培养皿相近,以保持CO₂扩散速率,从而维持pH稳定。

在传统方案中,采用玻璃底培养皿配合定制化包被,适合于对光学精度要求极高的实验(如TIRF显微术)。而南宫28则提供了一种创新方案,即免包被的亲水培养皿,非常适合用于常规共聚焦检测,该方案不仅节省了时间,还能降低污染风险。在成本方面,对于频繁实验,推荐批量采购免包被培养皿;而针对特殊细胞或高分辨率的需求,则仍然可选择包被方案。

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