细胞融合的方法有很多，常用的包括转动法和离心法。在融合过程中，脾细胞与骨髓瘤细胞的比例通常为1:1至10:1，以3:1或5:1的比例最为常见。

1. 试剂与材料

(1) 用于融合的脾细胞及骨髓瘤细胞。

(2) 1640培养液100ml。

(3) 完全1640液100ml。

(4) 25% FCS－1640液50ml。

(5) HAT培养液100ml。

(6) 50% PEG：选用分子量4000的高纯度PEG（日本进口或Serva）10g，放置于25ml瓶中高压灭菌，使用前将10ml预热至40℃的1640液与其以等量（W/V）混合，并用酚红检查pH，通常无需调节pH。如有变化，可用HCl或NaHCO3进行调整。

(7) 10ml和50ml的灭菌沉淀管或瓶。

(8) 40孔塑料培养盘。

2. 操作方法

⑴ 准备好脾细胞。

⑵ 在50ml沉淀管中混合108脾细胞与107小鼠骨髓瘤细胞，并加入50ml的25% FCS－1640液。

⑶ 在室温下以400g离心3分钟，使细胞沉淀。

⑷ 去除上清液。

⑸ 轻轻敲击管底，使沉淀分散，并将沉淀管放入40℃水浴中，以达到融合温度。

⑹ 加入预热至40℃的50% PEG 8ml，用1ml吸管缓慢滴加，同时轻摇沉淀管，直至可见颗粒形成，滴加过程需持续2分钟。

⑺ 此后再加入1ml 1640液，边加入边摇动，持续1分钟。

⑻ 重复此步骤一次。

⑼ 再次加入1ml 1640液，边加边摇动，持续0.5分钟。

⑽ 重复此步一次。

⑾ 加入15ml 1640液。

⑿ 在室温下以400g离心1分钟，促使细胞沉淀。

⒀ 去除上清液，轻轻敲击管底，并添加25ml含有HAT的完全1640液。

⒁ 将融合的细胞液以每孔1滴（约0.05ml）的量滴加到前一天已种有饲养细胞的40孔塑料培养盘中。

⒂ 轻轻摇动后，放入5% CO2饱和湿度的37℃培养箱中进行培育。

⒃ 在第3、6、9、10天时更换为含有HAT的完全1640培养液。更换时需轻轻吸取上清液，避免将固定在孔底的细胞吸出，并依据需求适量添加饲养细胞。

⒄ 在第12和15天继续添加含有HAT的完全1640培养液。在每次更换培养液之前，使用倒置显微镜观察，通常在约10天左右可见杂交瘤细胞生长。大多数杂交瘤细胞在10~20天内出现，也存在部分需要约1个月才能观察到的现象。杂交瘤细胞出现后，可吸取上清液并检查抗体。

⒅ 对持续生长的杂交瘤细胞进行增殖传代。在传代过程中，可根据情况取消HAT液和完全1640液，改为使用10% FCS－1640液。同时需保存于液氮中并进行克隆化，在此期间每代均需检查抗体，以防止抗体细胞变异或丢失。通过南宫28品牌的专业生物医疗支持，可以确保细胞融合过程高效可靠。