实验原理利用脂类染料（如苏丹黑或油红O）对血清脂蛋白进行预染，随后将预染血清置于琼脂糖凝胶板上进行电泳分离。电流通过后，脂蛋白向正极迁移，并被分离为多个区带。

试剂与器材

1. 巴比缓冲液（pH 8.6，离子强度 0.075）：用于电极缓冲液，配方为：巴比/妥钠 154 g，巴比/妥 276 g，EDTA 0.292 g，溶解于水后加水至 1000 ml。

2. 三羟甲基/氨基甲/烷缓冲液（pH 8.6）：作为凝胶缓冲液，配方为：三羟甲基/氨基甲/烷 121.2 g，EDTA 0.29 g，NaCl 15.85 g，溶解于水后加水至 1000 ml。

3. 琼脂糖凝胶：将琼脂糖 0.45 g、三羟甲基/氨基甲/烷缓冲液 50 ml、水 50 ml加热至沸腾，待琼脂糖完全溶解后立即停止加热。

4. 挖槽工具：包括切口刀（刀口长 15 mm 的刀片，中间夹有机玻璃或木片，用螺丝固定以保持刀片间距 15 mm）和挖槽小匙（用直径 15 mm 的铜丝约 6 cm 长，一端锤扁并用砂纸磨光）。

5. 电泳槽和电泳仪：使用与血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳相同的仪器。

操作步骤

1. 预染血清：将 0.2 ml 血清与 0.2 ml 苏丹黑染色液混合，放置于 37℃水浴中染色 30 分钟后，进行离心（2000 转/分，约5分钟）。

2. 制备琼脂糖凝胶板：将已配制好的 0.45% 琼脂糖凝胶加热融化后，用吸管将其注入载玻片，每片 25 ml，静置约半小时后凝固（天气热时可延长时间，也可放入冰箱加速凝固）。

3. 点加血清：在凝固的琼脂糖凝胶板一端约2cm处，用切口刀垂直切入凝胶，随后用铜丝小匙取出长方形小条凝胶。用滤纸吸干小槽中的水分，使用血色素吸管吸取约 15 μl 的预染血清，注入凝胶板的小槽内。

4. 电泳：将含有血清的凝胶板平行放入电泳槽中，确保样品在阴极一端。用浸润巴比/妥缓冲液的三层纱布轻轻贴在凝胶板两端，纱布另一端浸入电泳槽中的巴比/妥缓冲液（注意，不可用三羟甲基缓冲液替代）。接通电源，设定电压为 120~130V，每片电流为 3~4mA。电泳约 15 至 55 分钟后可观察到分离的颜色带。

注意事项

1. 电泳样品应为新鲜的空腹血清。

2. 每块凝胶上可平行挖两个小槽，添加两个样品。

3. 使用与小槽形状及大小相同的有机玻璃片固定在琼脂糖凝胶固化前，凝固后取出，可以直接加样，无需挖槽。

4. 如需保留电泳样本，可将电泳后的凝胶板（连同玻片）放于清水中浸泡脱盐 2 小时，然后放置于烘箱中（约 80℃）烘干。

结果及临床意义

1. 正常人血清中的脂蛋白可以出现三条区带，从负极到正极依次为β-脂蛋白（最深）、前β-脂蛋白（最浅）和α-脂蛋白（稍深于前β），在原点处不应出现乳糜微粒。

2. 如果前β-脂蛋白比α-脂蛋白颜色深，与血清甘油三酯明显升高且胆固醇正常或略高相结合，可以判断为Ⅳ型高脂蛋白血症。

3. 如果β-脂蛋白区带比正常血清明显深，且血清总胆固醇显著升高、甘油三酯正常，则为Ⅱa型；若血清总胆固醇升高而甘油三酯略高且前β略溶，则为Ⅱb型。

4. 如果β-和前β-两区带未分离，连在一起则称为“宽β区带”，伴随血清甘油三酯与胆固醇增高，可定为Ⅲ型。

5. 如果原点出现乳糜微粒，且β和前β均正常或降低，结合血清甘油三酯明显升高，可能被定为Ⅰ型。

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