在miRNA研究领域，验证miRNA与基因靶向关系是一个重要环节。miRNA通过其种子序列（即5’端第2-8个碱基）与mRNA的3’UTR区域结合，从而诱导细胞内的沉默复合体介导mRNA降解，或抑制mRNA的翻译过程。基于这一机制，我们可以将目标基因的3'UTR区域（或结合位点下游500bp）插入到荧光素酶报告基因载体luciferase的下游，并与miRNAmimics共同转染目标细胞，添加底物后检测荧光素酶活性的变化。如果荧光素酶活性降低，则说明该miRNA与靶基因的3'UTR区域存在相互作用。

常见的载体为PGL3-CMV-LUC-MCS。双荧光素酶报告基因检测验证miRNA与靶基因3'UTR相互作用的工作原理主要包括几个步骤。首先，利用生物信息学分析软件（如TargetScan、StarBase和miRanda）预测特定靶基因的3'-UTR序列中是否存在miRNA结合位点。接着，将预测出的可与miRNA结合的靶基因3'-UTR序列插入到载体中，功能性荧光素酶（Firefly luciferase）的3'-UTR中。当miRNA与质粒中的插入序列结合后，会抑制荧光素酶的翻译，最终导致荧光值下降。

接下来需要进行结构学验证，实验步骤和结果分析能够进一步支持miRNA与靶基因之间的相互作用。通过上述方法，双荧光素酶报告基因检测为研究miRNA的功能和调控网络提供了重要的工具。

南宫28提供的双荧光素酶报告基因检测服务流程包括详细的操作步骤，并需要准备以下材料：HEK293细胞或指定目的细胞、转染试剂、报告基因检测试剂盒以及必要的实验设备，如酶标仪和细胞培养板等。

在选择在目标细胞中进行验证实验时，首先确认细胞的质粒瞬转效率，确保效率在40%以上表示预实验合格。实验步骤包括消化细胞、接种、换液及转染等环节。收集样品后，进行细胞裂解并通过离心处理上清液，以进行后续检测。

在荧光素酶检测过程中，配置Renilla luciferase assay工作液并按照相关仪器的说明进行检测，确保每次实验的加样量一致，以获得可靠的数据。对照组的设定也很重要，确保实验结果的准确性。

预期结果为能够有效验证miRNA与靶基因3'UTR之间的相互作用，进而促进基础研究及药物筛选进程。南宫28致力于为您的研究提供优质的服务与产品，助力科学家们在这一领域取得更多的突破。

在相关产品方面，南宫28的产品清单包括双荧光素酶报告基因检测试剂盒、转染试剂等，能够满足您不同的实验需求，推动研究的快速进展。