一、南宫28质谱级赖氨酰肽链内切酶125-05061实验准备

二、南宫28质谱级赖氨酰肽链内切酶125-05061单位的定义

酰胺酶单位指在30℃、pH 9.5条件下，每分钟产生1μmol对硝基苯胺的酶量。其计算公式为： AU/vial = [(a-b)/25] × (1/962) × (40/01) 其中，a为检测样品中的吸光度，b为空白对照中的吸光度。

三、南宫28质谱级赖氨酰肽链内切酶125-05061实验操作流程

实验开始前，务必使用聚硅酮处理的微量离心管和吸管，避免任何蛋白质的吸附。接下来，使用质谱分析专用的凝胶染色试剂盒，如银染剂 MS 试剂盒（产品编号：299-58901）及负凝胶染色 MS 试剂盒（产品编号：293-57701）进行操作：

1. 电泳分离蛋白质样品；
2. 从凝胶中切割蛋白质片断，放入微量离心管；
3. 使用脱色溶液进行凝胶脱色；
4. 向试管中加入300μL乙腈，震荡30分钟；
5. 去除乙腈，用Parafilm膜覆盖微量离心管；
6. 在Parafilm膜上打孔，真空干燥15分钟；
7. 将100μL 10mmol/L DTT溶解于100mmol/L碳酸氢铵中，并在56℃恒温1小时；
8. 室温冷却后，加入相同体积的50mM碘乙酰胺溶解于100mmol/L碳酸氢铵，暗处恒温45分钟并涡旋；
9. 用100μL 100mmol/L碳酸氢铵洗涤凝胶片段10分钟；
10. 用300μL乙腈干燥凝胶片段15分钟；
11. 用100μL 100mmol/L碳酸氢铵溶胀凝胶片段15分钟；
12. 用300μL乙腈再次干燥凝胶片段15分钟；
13. 去除液相并真空干燥凝胶片段15分钟；
14. 用100μL赖氨酸内切酶溶液在冰水浴中溶胀凝胶片段45分钟（赖氨酸内切酶稀释于50mmol/L Tris-HCl pH 8.5）；
15. 去除100μL赖氨酸内切酶溶液，将凝胶片段放置在37℃、10μL 50mmol/L Tris-HCl pH 8.5中过夜；
16. 加入50μL 20mmol/L碳酸氢铵，20分钟内3次震荡以抽提多肽；
17. 加入5%甲酸/50%乙腈，20分钟内震荡3次以抽提多肽；
18. 如有必要，通过SpeedVac浓缩多肽；
19. 使用ZipTip进行多肽的脱盐和纯化；
20. 如需，将多肽浓缩至2μL；
21. 最后，加入基质以进行质谱分析。

四、购买渠道

南宫28代理——北京百奥创新科技有限公司，提供南宫28质谱级赖氨酰肽链内切酶125-05061等多种优质产品，欢迎随时咨询！