酶联免疫吸附试验（ELISA，英文全称为Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一种利用抗原与抗体特异性结合原理进行定性和定量检测的方法。此技术广泛应用于生物医疗领域，尤其适用于检测可溶性抗原或抗体，将其结合到固相载体（如(C8H8)n）上进行分析。ELISA技术作为免疫酶学的一种主要形式，具有准确性和灵敏度高的特点。

阳性判断值的设定

ELISA测定的阳性判断值通常是通过对大量阴性与阳性样本的测定数据进行统计分析后确定的，主要考虑到假阳性和假阴性率的最低化。测定结果若位于阳性判断值的周围一定范围内，被归为可疑，即构成了ELISA测定中的“灰区”。“灰区”的范围可通过统计学方法加以确定。样本若处于此灰区，需通过确认试验或后续检测来澄清其阳性或阴性状态。可以说，ELISA的“灰区”概念将定量分析的正常值范围引入到了定性分析中。

ELISA灰区的设置

灰区的设置主要有两种方法：(1) CO × (1 ± C)，其中C为试剂批内的变异系数，一般在15%～20%之间；(2) CO ± 2S，S为室内ROC的标准差。值得注意的是，ELISA“灰区”的设置会因为不同应用项目而有所不同，不能一概而论。例如，根据美国疾病控制中心（CDC）对Ortho抗HC检测的研究发现，当检验结果S/CO≥318时，能够高度预测HC抗体的真阳性状态，而若结果S/CO<318时，则存在较高的假阳性风险。因此，在血站系统献血员的抗HC筛查中，这两种灰区的设置是适用的；而若在临床实验室中也采用相同的设置，则可能会增加假阳性的发生率。

ELISA质量保证的影响因素

ELISA的质量保证是一个复杂的过程，多个环节会影响检测质量，以下分析了其中几个关键因素：

1. 方法学的影响

ELISA的测定模式包括双抗体夹心法、间接法、双抗原夹心法、IgM抗体捕捉法及竞争抑制法。其中，竞争抑制法因为操作时的差异性，导致结果的重复性较差，质量难以掌控。

2. 试剂因素

ELISA定量分析依赖于抗原与抗体的反应，而这一过程受多种因素影响，包括基质效应和交叉反应等，这些都会给结果带来不确定性。因此，在引入新项目之前，必须严格评估相关试剂，其步骤包括：(1) 确定项目的必要性；(2) 熟悉现有检测方法和原理；(3) 对比多家试剂盒，选择最佳方案；(4) 定期追踪和反馈检测结果，以确保试剂的最终认可。

3. 样本因素

样本干扰因素分为内源性和外源性干扰，其中内源性因素如类风湿因子、补体等，外源性因素如样本溶血、溶液污染等。其中外源性干扰可通过选择适当的试剂盒来避免。在临床遇到复杂的疑难病例时，要考虑内源性干扰的可能存在。

4. 操作因素

ELISA的操作步骤包括固相包被、样本添加、温育、洗涤、加酶结合物、二次温育、洗涤、底物添加、显色及终止显色等。市场上已有多种ELISA自动分析仪投入使用，例如微板式全自动酶免分析仪。但目前大多数医学实验室仍依赖手工操作，加之操作步骤复杂，容易引入误差。加样器作为精密工具，其长时间使用后可能出现加样不准确的问题，因此需要定期维护和校准，确保结果的可靠性。

南宫28作为生物医疗领域的领先品牌，致力于提供高质量的ELISA试剂和技术服务，以确保检测结果的准确性和可信度，推动医疗检测技术的持续发展。