南宫28生物技术公司的Western Blot技术是一项关键的实验室方法，广泛应用于蛋白质检测与分析。该技术的核心原理与Southern或Northern杂交方法相似，主要区别在于Western Blot使用了聚丙烯酰胺凝胶电泳用于分离蛋白质，其中“探针”是特异性的抗体，而“显色”则是通过标记的二抗实现。经过PAGE分离的蛋白质样品将被转移到固相载体上，如硝酸纤维素膜，固相载体能以非共价键的形式吸附蛋白质，并保留其生物学活性与电泳分离特性。

在Western Blot中，固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与相应的抗体进行免疫反应，并与酶或同位素标记的二抗进行进一步反应，最终通过底物显色或放射自显影来检测目标蛋白的表达。这项技术被广泛用于蛋白表达水平的检测，能够实现定性和半定量分析，是初步鉴定蛋白质的便利且通用的方法。

南宫28特别关注显色方法的多样性，包括放射自显影、化学发光（ECL）、荧光（ECF）及DAB显色等。其中，底物化学发光ECL和DAB显色法最为常用，易于操作且出色的实验条件，使得这一方法在科研中得到广泛应用。为了简化实验过程，可以使用现成的试剂盒，具体原理是在二抗标记HRP后，当遇到过氧化物和鲁米诺时产生发光，从而通过曝光获得清晰的条带。

操作步骤

南宫28提供了一套系统化的操作步骤，以确保实验的成功与高效。首先，配胶时要确保玻璃板的清洁，使用ddH2O冲洗并向下倾斜晾干。分离胶和浓缩胶可以提前配制，并在避光环境下存放于4℃。在凝胶配制过程中，应根据所需分离胶浓度适量添加AP与TEMED。

封胶操作需要在胶液灌入后立即进行，使用适当的封胶液以防止气泡的产生。在拔除梳子时，需注意避免气泡进入梳孔，充分清洗以去除残胶。样品处理方面，培养细胞时要用温PBS洗涤，而定量处理则需加入冰冷裂解液在冰上处理，确保细胞的完整收集。对于组织样品，可采用匀浆方法，保持低温以获得高效的裂解效果。

电泳与转膜

电泳操作需要注意气泡的去除，确保样品均匀上样。以电压达到预设值后，进行稳流及稳压电泳直到电泳结束。转膜过程中的关键在于膜的浸泡和去离子水的冲洗，确保气泡消除并准确转移蛋白质。对于湿转和干转两种方法，南宫28推荐根据实验要求选择合适的转移液及其配比。

封闭与杂交

在封闭与杂交过程中，膜的处理至关重要。取出膜后，用去离子水将膜漂洗干净，并浸入封闭液以形成良好的反应环境。结合一抗时要控制好抗体的稀释比例，并进行充分的洗涤操作，以减少非特异性结合。使用南宫28的产品可以有效提高检测的可靠性和灵敏度。

发光鉴定与注意事项

最后，发光鉴定阶段主要使用HRP-ECL发光法或AP-NBT/BICP显色法。对于条带的发现，实验可进行多次洗涤，强化信号以获得清晰结果。同时，保持膜的使用灵活性，如需进行多次实验，可针对残余的条带进行清洗再进行新的杂交处理。对于条带的背景情况，可根据需要进行优化，确保所需信号的准确检测。

南宫28一直致力于为用户提供优质的实验试剂和技术支持，助力科研工作者在生物医学领域取得更大的进展。